Στεγάζεται από το 1984 σε ένα διώροφο κτίσμα του Καστελορίζου, τμήμα του μεσαιωνικού κάστρου του Αγίου Νικολάου. Στο ισόγειο υπάρχουν τρεις μικρές αίθουσες, μια με αναπαράσταση τέμπλου παλαιοχριστιανικού ναού με γλυπτό διάκοσμο, μια με αμφορείς και λίθινες άγκυρες πλοίων, και μια με στολή και εξοπλισμό σφουγγαρά. Στον όροφο θα δείτε αμφορείς, επιτύμβιες στήλες, αγγεία, ένα εικονίδιο του Αγίου Δημητρίου από στεατίτη, εμφιαλωμένα πινάκια από ναυάγιο και εκκλησιαστικά εκθέματα, όπως εικόνες, είδη μικροτεχνίας, σχέδια εκκλησιών και τμήματα εντοιχισμένης αγιογραφίας του 17ου αιώνα. Στην τελευταία αίθουσα εκτίθεται λαογραφικό υλικό, όπως παραδοσιακές ενδυμασίες του Καστελορίζου, έπιπλα, κεραμικά, μαγειρικά σκεύη και διάφορα αντικείμενα καθημερινής χρήσης.